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蛋白多因子檢測(cè)
蛋白質(zhì)多因子檢測(cè)已經(jīng)是一種常用于生物學(xué)研究的生物化學(xué)技術(shù)，能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)樣本中的多個(gè)微量表達(dá)功能性蛋白質(zhì)進(jìn)行定量或者定性，結(jié)合高通量上樣技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)一次實(shí)驗(yàn)對(duì)多個(gè)樣本中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。
省時(shí) 省力 省人工 省經(jīng)費(fèi)
利用蛋白質(zhì)多因子檢測(cè)，我們單次實(shí)驗(yàn)也可以獲得與質(zhì)譜一樣的組學(xué)級(jí)別的數(shù)據(jù)，通過各組比較，我們能獲得組間的差異因子有哪些，結(jié)合數(shù)據(jù)庫富集分析，我們可以獲得與實(shí)驗(yàn)處理相關(guān)的分子功能，疾病、信號(hào)通路相關(guān)的上下游聯(lián)系。
高通量 大數(shù)據(jù) 大文章
蛋白多因子檢測(cè)的應(yīng)用
2024
在生物學(xué)研究，對(duì)樣本中多個(gè)功能性靶標(biāo)表達(dá)量同時(shí)分析，可以獲得實(shí)驗(yàn)樣本整體的炎癥、趨化、免疫等分子機(jī)制、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能、磷酸化程度等，在整個(gè)研究項(xiàng)目的上游方案擬定或者下游結(jié)果驗(yàn)證都使用。
在臨床醫(yī)學(xué)、中醫(yī)藥學(xué)、藥學(xué)、流行病學(xué)研究中，針對(duì)疾病診斷治療的科學(xué)研究中，與生物學(xué)研究類似，利用蛋白質(zhì)多因子檢測(cè)技術(shù)結(jié)合大隊(duì)列能快速判斷疾病的誘發(fā)機(jī)制、關(guān)鍵標(biāo)志物篩選、治療藥物篩選、治療方案優(yōu)化等。
在功能性食品、環(huán)境、生物材料等與人類健康改善、壽命延長(zhǎng)相關(guān)的研究領(lǐng)域中蛋白質(zhì)多因子評(píng)估也有很重要的作用，檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組的微量功能性蛋白質(zhì)表達(dá)水平可以從蛋白組水平評(píng)估研發(fā)的產(chǎn)品的使用效果。
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蛋白多因子檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)
2024
除了明顯的檢測(cè)指標(biāo)數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)，與傳統(tǒng)的單靶標(biāo)檢測(cè)技術(shù)例如WB、ELISA相比，蛋白多因子檢測(cè)技術(shù)具有相當(dāng)多的優(yōu)勢(shì)！
（1）操作簡(jiǎn)單，無需特殊處理，無需高溫煮沸，無需特殊儀器，以RayBio多因子檢測(cè)技術(shù)（抗體芯片）為例：
①樣本處理：血清樣本制備只需簡(jiǎn)單稀釋，細(xì)胞、組織等樣本只需簡(jiǎn)單破碎裂解無需煮沸，其余上清、洗液視具體情況而定是否需要透析濃縮。
②實(shí)驗(yàn)步驟：將樣本孵育至預(yù)包被的蛋白質(zhì)捕獲抗體芯片上，到時(shí)間清洗、添加二抗、顯色底物，上機(jī)檢測(cè)熒光（是不是和ELISA一樣簡(jiǎn)單）。
③常規(guī)做過WB的實(shí)驗(yàn)室即可滿足實(shí)驗(yàn)需求，無需購買額外試劑、耗材、儀器！
（2）樣本需求量少，單次上樣量低至10μL即可檢測(cè)20+個(gè)因子！
（3）樣本兼容性高，除了常規(guī)的血清、血漿、細(xì)胞裂解物等樣本，在科研中取得的灌洗液、組織沖洗液、尿液、乳汁等都能作為檢測(cè)樣本，并且已經(jīng)有很多成功案例。
（4）靈敏度高，利用與ELISA相同的抗原抗體結(jié)合原理，采用與生產(chǎn)ELISA試劑盒同樣的抗體進(jìn)行芯片包被，對(duì)樣本的檢測(cè)靈敏度可達(dá)pg級(jí)別。
（5）穩(wěn)定性性高， 以rayplex流式多因子檢測(cè)試劑盒為例，在精準(zhǔn)度評(píng)估中，一個(gè)試劑盒中檢測(cè)的所有因子的CV值都在7%以下。
技術(shù)原理
2024
目前，蛋白質(zhì)多因子檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)有非常多的專利申請(qǐng)，但是靈敏度最高的技術(shù)還是需要依靠抗原抗體的特異性識(shí)別為基礎(chǔ)，下面介紹的幾種技術(shù)就是目前市面上開發(fā)高靈敏多因子檢測(cè)技術(shù)試劑盒常用的實(shí)驗(yàn)方法：
雙抗夾心：將所有待檢測(cè)因子的捕獲抗體按照一定順序包被在修飾后的載玻片或NC膜上，與樣本中對(duì)應(yīng)靶標(biāo)結(jié)合后，再結(jié)合檢測(cè)抗體，激發(fā)HRP底物或者是CY3的熒光，通過熒光強(qiáng)度進(jìn)行多因子的定量。
CBA技術(shù)：結(jié)合雙抗夾心法的免疫分析技術(shù)將捕獲抗體包被在不同尺寸及熒光（如：APC）強(qiáng)度的流式微珠上檢測(cè)抗體攜帶另一種熒光（如：PE），對(duì)樣本進(jìn)行孵育后，使用標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞儀平臺(tái)對(duì)液體樣本中多種可溶性蛋白進(jìn)行一次性定量分析。
標(biāo)記法：直接對(duì)樣本中蛋白質(zhì)進(jìn)行生物素標(biāo)記，與預(yù)包被的一抗進(jìn)行結(jié)合后激發(fā)HRP底物或者是CY3的熒光進(jìn)行多因子半定量檢測(cè)。
蛋白多因子技術(shù)的檢測(cè)平臺(tái)
多因子檢測(cè)技術(shù)的普及，也依賴于其對(duì)檢測(cè)儀器的適配性，不像質(zhì)譜技術(shù)，目前市面上多種多因子檢測(cè)試劑盒所需要的儀器都是我們實(shí)驗(yàn)室常備的，例如：
WB成像系統(tǒng)：膜芯片系列利用傳統(tǒng)WB曝光系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，曝光儀、膠片機(jī)均可檢測(cè)。
流式細(xì)胞儀：利用CBA技術(shù)的rayplex流式多因子利用含有PE及APC通道的流式細(xì)胞儀即可檢測(cè)。
玻璃芯片掃描儀：玻璃芯片系列檢測(cè)需要具有Cy3熒光劑（綠色）通道，能夠掃描標(biāo)準(zhǔn)大小的玻片（25*75*1mm），≤20μm的像素分辨率的掃描儀 （大多數(shù)基因芯片掃描儀都可進(jìn)行檢測(cè)）。
蛋白質(zhì)多因子檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用前景
2024
科研技術(shù)不斷突破，探索的邊界也在不斷擴(kuò)大。在這個(gè)充滿未知的世界里，我們需要能幫我們快速鎖定目標(biāo)，還能讓我們的研究更加精準(zhǔn)的科學(xué)技術(shù)，來幫我突破層層科研難題。
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